რაც უფრო დიდია მოლეკულური წონა, მით უფრო გრძელია ხვეული და ნელა მიდის მოლეკულა. ასე რომ, ელექტროფორეზი + SDS გამოყოფს მოლეკულური წონის მიხედვით და არა ბუნებრივი მუხტის საფუძველზე. მნიშვნელოვანი შენიშვნა: ერთი და იგივე სიგრძის ცილები, როგორც წესი, არ შეიძლება გამოიყოს გელის ელექტროფორეზით + SDS.
როგორ გამოყოფთ ერთი და იგივე მოლეკულური წონის ცილებს?
ცენტრიფუგაცია, ელექტროფორეზი და ქრომატოგრაფია ცილების გაწმენდისა და ანალიზის ყველაზე გავრცელებული ტექნიკაა. ცენტრიფუგაცია გამოყოფს ცილებს მათი დალექვის სიჩქარის მიხედვით, რაც გავლენას ახდენს მათ მასაზე და ფორმაზე.
რომელი ტექნიკა გამოყოფს ცილებს ფასის მიხედვით?
პროტეინები შეიძლება გამოიყოს მათი წმინდა მუხტის მიხედვით იონგაცვლის ქრომატოგრაფიით. თუ პროტეინს აქვს წმინდა დადებითი მუხტი pH 7-ზე, ის ჩვეულებრივ უკავშირდება მძივების სვეტს, რომელიც შეიცავს კარბოქსილატულ ჯგუფებს, ხოლო უარყოფითად დამუხტულ ცილას არა (სურათი 4.4).
ჩამოთვლილთაგან რომელია საუკეთესოდ მოლეკულური წონის მიხედვით ცილების განცალკევებისთვის?
დაყოფაზე დაფუძნებული ქრომატოგრაფიის მეთოდები ძალზე ეფექტურია მცირე მოლეკულების გამოყოფისა და ამინომჟავების, ნახშირწყლების და ცხიმოვანი მჟავების იდენტიფიცირებისთვის. თუმცა, აფინური ქრომატოგრაფიები (ე.ი. იონგაცვლის ქრომატოგრაფია) უფრო ეფექტურია მაკრომოლეკულების, როგორც ნუკლეინის მჟავების და ცილების გამოყოფაში.
რომელი ტიპის სვეტიქრომატოგრაფია გამოყოფს ცილებს მოლეკულური წონის მიხედვით?
გელის ფილტრაციის (GF) ქრომატოგრაფია გამოყოფს ცილებს მხოლოდ მოლეკულური ზომის მიხედვით. განცალკევება მიიღწევა ფოროვანი მატრიცის გამოყენებით, რომელზედაც მოლეკულებს, სტერიკული მიზეზების გამო, აქვთ წვდომის სხვადასხვა ხარისხი - ანუ, პატარა მოლეკულებს აქვთ უფრო დიდი წვდომა და უფრო დიდი მოლეკულები გამორიცხულია მატრიციდან.
