რადგან სონიფიკაციას შეუძლია პოტენციურად დაშალოს ცილები და დენატურაცილის ეპიტოპები, ჩვენ შემდგომ შევაფასეთ სონიკაციის გავლენა ცილის მთლიანობაზე.
შეიძლება თუ არა სონიკაციამ დააზიანოს ცილები?
პოპულარული პასუხები (1)
სტანდარტული სონიკაციის პროტოკოლი მეტად არ შეიძლება გამოიწვიოს ცილის ფრაგმენტაცია - ენერგია ძალიან დაბალია. მისი დენატურაციაც კი არ უნდა გამოიწვიოს. ის შეიძლება დენატურირებული იყოს, როდესაც მას ძალიან დიდხანს აწვებით და ნიმუშს გადახურავთ. თუ იყენებთ ნიკელის ქრომატროგრაფიას, სხვა ზოლები შეიძლება იყოს უბრალოდ მინარევები.
შეიძლება თუ არა სონიკაციით დაარღვიოს პეპტიდური ბმები?
ბგერითი ჩვეულებრივ ვერ არღვევსცილის პირველად სტრუქტურას, რადგან ეს სტრუქტურა (ამინომჟავების თანმიმდევრობა) აგებულია კოვალენტური ბმებისგან, რომლებიც ბევრჯერ უფრო ძლიერია, ვიდრე წყალბადის ბმები. უზრუნველყოს ენერგია, რომელიც საჭიროა ამ ობლიგაციების გასაწყვეტად.
მტვრევა არღვევს ბირთვულ მემბრანას?
მოკლე სონიკაციით დაბალი ენერგიით შეიძლება დაარღვიოს პლაზმური მემბრანა ძალიან ბევრი მიტოქონდრიული ან ბირთვული მემბრანის გატეხვის გარეშე, რომლებიც წარმოიქმნება ტაქტიან მიტოქონდრიებში.
აუცილებელია ცილის ექსტრაქციისთვის სონიკა?
სარეცხი საშუალებების ხსნადიზაცია (მაგ. SDS), რომელიც საჭიროა მემბრანის ცილების იზოლაციისთვის, იწვევს ლიზატს მსგავს წებოს, ძირითადად ნუკლეინის მჟავების გამო. ამიტომ ასეთ შემთხვევებში საჭიროა სონიკა ამ ნუკლეინის მჟავების დასაშლელად. Sonication წარმოქმნის უამრავ სითბოს და არ არის კარგიბევრი ცილა.
