ტრიფსინიზაცია არის უჯრედების დისოციაციის პროცესი ტრიპსინის, პროტეოლიზური ფერმენტის გამოყენებით, რომელიც ანადგურებს ცილებს, რათა დაშორდეს მიბმული უჯრედები ჭურჭელიდან, რომელშიც ისინი კულტივირდებიან. როდესაც ემატება უჯრედულ კულტურას, ტრიპსინი ანადგურებს ცილებს, რომლებიც უჯრედებს საშუალებას აძლევს შეაერთონ გემზე.
რატომ ვაკეთებთ უჯრედების ტრიფსინს?
ტრიფსინიზაცია ხშირად კეთდება უჯრედების ახალ კონტეინერში გადასვლის დასაშვებად, ექსპერიმენტისთვის დაკვირვება ან კოლბაში შერწყმის ხარისხის შემცირების მიზნით პროცენტის ამოღებით. უჯრედები.
როგორ მუშაობს ტრიპსინი უჯრედების გამოყოფაზე?
ტრიფსინი/EDTA არის უჯრედების გამოყოფის კომბინირებული მეთოდი. ტრიპსინი ჭრის ადჰეზიურ პროტეინებს უჯრედ-უჯრედსა და უჯრედ-მატრიქსის ურთიერთქმედებებში ადჰეზიური ცილების ამინომჟავის დაჭრით სპეციალურად ლიზინთან ან აგინინთან C-ტერმინალზე, თუ ზემოთ ამინომჟავა არ არის პროლინი.
როგორ იღებთ ტრიფსინიზებულ ადჰერენტულ უჯრედებს?
პროცედურა
- ამოიღეთ საშუალება კულტურის ჭურჭლიდან ასპირაციის გზით და გარეცხეთ მონოფენა მარილის ხსნარით თავისუფალი Ca2+ და Mg 2+ შრატის ყველა კვალის მოსაშორებლად. …
- გაანაწილეთ იმდენი ტრიპსინი ან ტრიფსინი/EDTA ხსნარი კულტურის ჭურჭელ(ებ)ში, რათა მთლიანად დაიფაროს უჯრედების მონოფენა და მოათავსეთ 37 °C ინკუბატორში ~2 წუთის განმავლობაში.
როგორ გამორთო ტრიპსინი უჯრედულ კულტურაში?
როდესაც უჯრედები გამოყოფილია, დაამატეთ 2 ტომიწინასწარ გაცხელებული სრული ზრდის მედიატრიპსინის ინაქტივაციისთვის. ნაზად გაანაწილეთ საშუალო უჯრედის ფენის ზედაპირზე რამდენიმეჯერ პიპეტირებით, რათა უზრუნველყოთ უჯრედების >95% აღდგენა. შრატისგან თავისუფალი კულტურებისთვის, სოიოს ტრიპსინის ინჰიბიტორი (პროდუქტის No.
