როდესაც უჯრედები მოწყვეტილი გამოჩნდება, დაამატეთ 2 ტომი წინასწარ გახურებული სრული ზრდის მედია ტრიპსინის ინაქტივაციისთვის. ნაზად გაანაწილეთ საშუალო უჯრედის ფენის ზედაპირზე პიპეტირებით რამდენჯერმე, რათა უზრუნველყოთ უჯრედების >95% აღდგენა.
როგორ შევაჩერო ტრიპსინის აქტივობა?
ტრიპსინის მონელება შეიძლება შეჩერდეს გაყინვით ან რეაქციის pH-ის შემცირებით pH 4-ზე დაბალი ფორმულის, ძმარმჟავას ან ტრიფტორძმარმჟავას დამატებით (ტრიფსინი აღადგენს აქტივობას, როდესაც pH ამაღლებულია pH 4-ზე). დამუშავებული ნიმუშების შენახვა შესაძლებელია -20°C ტემპერატურაზე.
რა ანეიტრალებს ტრიპსინს?
ბუფერი, რომელიც შეიცავს კალციუმის და მაგნიუმის იონებს, ასევე შეანელებს ტრიპსინის აქტივობას. თუმცა, FBS უფრო ეფექტური გზაა ტრიპსინის აქტივობის დასათრგუნად.
აინაქტივირებს თუ არა შრატი ტრიპსინს?
შრატი ააქტიურებს ნარჩენ ტრიპსინს, რომელიც რჩებათირკმელების ფერმენტული მონელების შედეგად და უჯრედების მიერ შემდგომში სინთეზირებული პროტეოლიზური ფერმენტები. ახლად ტრიფსინირებული უჯრედები შეიძლება გადაიზარდოს მონოფენებად შრატის არარსებობის შემთხვევაში, იმ პირობით, რომ ისინი განმეორებით გაირეცხება ნარჩენი ტრიპსინის მოსაშორებლად.
რამდენი მედიაა საჭირო ტრიპსინის დეაქტივაციისთვის?
სანამ თქვენ იყენებთ 5-10% შრატის შემცველ საშუალებებს თქვენი ტრიპსინთან ერთად მინიმუმ 1:1 თანაფარდობით, უნდა იყოს საკმარისზე მეტი ინჰიბირება, რასაც მოჰყვება ცენტრიფუგაცია. და საშუალო გაცვლა ახალ საშუალებებთან.
